水中活细胞计数方法（ ）。

水中活细胞计数方法（ ）。

A 、显微镜直接计数法

B 、平板法

C 、染色涂片

D 、平板菌落法

参考答案:

【正确答案：D】

水中活细胞计数方法是平板菌落法。

如何对活细胞进行计数

用台盼蓝拒染法计数活细胞:1. 彻底混合细胞悬液,取100礚样本至一支试管中.2. 台盼蓝染色有两种方法.一是首先用细胞培养液稀释细胞样本,然后用台盼蓝溶液(产品号 #07050) 1/2稀释样本（细胞和台盼蓝的稀释比为1:1）.或者直接用台盼蓝溶液稀释样本.例如：

1、/40稀释样本加入50礚 细胞悬液至950礚 IMDM+2% FBS (1/20 稀释),混合,然后取100礚稀释的细胞悬液加入100礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40).或取20礚细胞悬液加入780礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40).3. 涡悬振荡,混合稀释的细胞样本.4. 血细胞计数器的准备：首先用酒精清洁其小室和盖玻片,然后用脱脂绵擦干.5. 仔细的将盖玻片覆盖两个小室.6. 用微量移液器或毛细管吸取稀释的样本.7. 用微量移液器或毛细管将样本充满两个小室.不要过满或不足.8. 计数4个大方格中细胞核的总数(1x1x0.1mm)或&gt100个细胞.分别死细胞和活细胞.死细胞染成蓝色的死细胞(因为细胞完整性破坏,细胞吸收台盼蓝),活细胞透明有折光（未染色）.9. 活细胞计数按以下方法计算：每个方格中活细胞总数平均值x稀释倍数x104= 活细胞数/mL

到底怎样计数细胞呢？稀释倍数怎么算

一般来说细胞的计数方法是：细胞数/mL=4个大格细胞总数/4×10000×稀释倍

数

操作步骤：

1.取10ul细胞悬液与10ul台盼兰混合均匀于1.5ml离心管中。

2.盖上盖玻片，取10ul混合液自血球计数盘上方加入，于10倍生物显微镜下观察，活细胞不染色，死细胞被染成蓝色。

3.分别计数四个大方格，得到细胞总数，再除以4，乘以稀释倍数（本实验为2），最后乘以104，即为每ml细胞悬液中细胞数。若细胞位于线上，只计上线与左线（计上不计下，计左不计右）。

注：

1.细胞数/ml＝4大格细胞总数×稀释倍数×104/4；每一大格的体积为＝0.1cm×0.1cm×0.01cm＝10-4ml

2.计数板计数时，最适细胞浓度为5～10×105个/ml，此范围外计数误差偏大。

3.高浓度细胞悬液，可取出部分作稀释或连续稀释后计数。

例

活细胞数/方格：55，62，49，59；死细胞数/方格：5，3，4，6；细胞总数＝243

平均细胞数/方格＝60.75；稀释倍数＝2；

细胞数/ml：60.75×104×2＝1.22×106；

细胞数/flask（10ml）：

1.22×106×10ml＝12.2×106

存活率：225/243﹦92.6%