dna的提取方法
发表时间:2024-07-18 02:38:20
来源:网友投稿
dna的提取方法:浓盐法、SDS法、CTAB法等。
一、浓盐法。
1、根据DNA和RNA在电解溶液中的溶解度不同,可将二者分离。
2、常用1mol/LNaCl抽提,得到的DNP黏液中加入含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使之乳化,再离心,使蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA则位于上层水相中。
3、回收水相,用2倍体积95%的乙醇可将DNA钠盐沉淀出来。
二、SDS法。
1、将生物细胞破碎后,加入SDS使细胞膜裂解,同时使蛋白质变性,将蛋白质和多糖等杂质与DNA分开。
2、加入乙酸钾可使SDS-蛋白质复合物转变成溶解度更小的钾盐形式,使沉淀更加完全。
三、水抽提法。
1、利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液。
2、在上清中加入固体NaCl调节至2.6mol/L,加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出。然后分别用66%、80%和95%乙醇以及丙酮洗涤。
3、最后在空气中干燥即得DNA样品。此法提取的DNA中蛋白质含量较高,可在提取过程中加入SDS加以改良。
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