单细胞测序技术

发表时间：2024-07-19 10:45:13 来源：网友投稿

单细胞测序的知识系统学习单细胞转录组测序scRNA-Seq(一)

单细胞测序方法包括多种，区别在于两方面：定量方法，tag标签或全长；捕获策略，微孔microwell-，微液流microfluidic-,微滴droplet-。

微流控平台主要包括顶部的微孔装置和底部的微流控通道。微孔大小可根据需要改变，当捕获到细胞后，翻转装置，能继续培养细胞系。视频链接

建库过程包括：裂解细胞，游离RNA与附有BC、UMI及接头序列的磁珠连接在引物作用下完成cDNA第一链合成，而后cDNA第二链合成，最后扩增。测序方法通常是IlluminaHiseq技术。

因为有BC（BeadCode）序列，在后期定量时就能够区分该序列属于哪个细胞，从而获得单个细胞文库的测序定量结果。

目前有两种定量方法，基于tag和基于全长。前者对3'端RNA序列测序，通过UMI定量序列，因而对低丰度RNA仍获得比较好的定量结果，但是对分析isoform并不友好；后者获得一致的read序列，通过序列覆盖度定量，此方法对高表达RNA定量准确性更好。

Smart-seq2methodUMImethod

micro-well

sci-RNA-seq3

单细胞测序的两个主要难题是，细胞分选及细胞表达文库构建。细胞分选可依据细胞大小、细胞自身电荷属性、细胞与抗体特异性结合等。得到单个细胞即对其打上标签，而后将细胞裂解，根据需要以tag或全长方式构建文库进行测序。

免责声明：本站发布的教育资讯（图片、视频和文字）以本站原创、转载和分享为主，文章观点不代表本网站立场。

如果本文侵犯了您的权益，请联系底部站长邮箱进行举报反馈，一经查实，我们将在第一时间处理，感谢您对本站的关注！