基因组高通量测序的原理

发表时间：2024-07-25 16:37:41 来源：网友投稿

测序方案建立在双脱氧测序法(Sanger等，1977)的基础上。为了从每一克隆插入片段两端成对地进行测序，每一个质粒模板DNA板应配备两个384孔循环测序反应板。

测序反应采用BigDyeTerminatorchemistryversion3．1(AppliedBiosystems)和标准M13或常用正向引物和反向引物。测序反应通过BiomekFX(Beckman)移液操作工作站建立。

机械臂负责等分模板试样，起与反应液混合的作用，反应液含有双脱氧核苷酸、荧光标记的核苷酸、TaqDNA聚合酶、序列引物和缓冲液。

模板和反应板有条形码，且在BiomekFX移液操作工作站上有条形码读取器跟踪，确保模板和反应液转移中没有错误。30～40线性扩增步骤连续循环在MJResearchTetrads或9700热循环仪(Ap—pliedBiosystems)中进行。

扩展资料：

技术发展：

高通量测序平台(high-throughput_genome_sequence_database)自从2005年454LifeSciences公司（2007年该公司被Roche正式收购）推出了454FLX焦磷酸测序平台（454FLXpyrosequencingplatform）以来。

曾推出过3730xlDNA测序仪（3730xlDNAAnalyzer）的AppliedBioSystem（ABI）这家一直占据着测序市场最大份额的公司的领先地位就开始动摇了。

因为他们的拳头产品毛细管阵列电泳测序仪系列（seriescapillaryarrayelectrophoresissequencingmachines）遇到了两个强有力的竞争对手，一个就是罗氏公司(Roche)的454测序仪(RochGSFLXsequencer)。

另一个就是2006年美国Illumina公司推出的Solexa基因组分析平台（GenomeAnalyzerplatform），为此，2007年ABI公司推出了自主研发的SOLiD测序仪(ABISOLiDsequencer)。这三个测序平台即为目前高通量测序平台的代表。

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