兰花组织培养的外植体种类和快速繁殖的步骤

外植体的采集及接种

1.

外植体的采集

外植体的采集是依据不同的培养目标而异。通常选取一些生长健壮的当年生枝条、饱满而未萌芽的侧芽作

为外植体。其取材季节对于大多数植物而言，都应在生长开始的季节采样，对于利用茎尖培养的植物一般材料

越小成活率越低，所以茎尖培养成活的临界大小应为一个茎尖分生组织带1～2个原基，约0.2～0.3mm,茎段长约0.5cm。

2.

外植体的清洗

待外植体采回后，先用流水冲洗半小时左右，使其表面吸附物消除，在转入其他容器中加上洗涤剂进行清

洗；在将易感染的各部分剥去、洗净，再切去上部幼叶。

3.

消毒与接种

接种是组织培养是否成功的关键因素。接种前必须对接种室、接种人员，接种材料进行彻底的消毒与灭菌。

针对外植体的灭菌处理，则先将外植体在

75%的酒精中浸10s，再用蒸馏水冲洗三次。再剥取2～3片叶，放入5%次氯酸钠水溶液5min，再用无菌水冲洗3～4次，剥至留下最后一枚叶片，以生长点为中心切去0.3～0.4cm的方块，将切下的外植体接入准备好的培养瓶中进行培养。

外植体经消毒接入启动培养基或者诱导培养基中诱导出花芽，再转入继代培养基中，则诱导产生簇生的原

球茎。

4.

培养

培养温度为20～25℃，每天12～16h，光照强度为1000～2000Lx。

继代增殖

经适宜培养后，约4～6周后可在外植体周围形成许多球状物，即原球茎，将其分割接入培养基中，以促使嫩茎长出更多的原球茎，从而分化培养成苗。切取茎尖时要带两个左右叶原基，茎尖大小对增值速率也有影响，同时继代周期对原球茎增殖也有影响原球茎随继代周期的延长而增加。

（一）试管苗生根壮苗培养

在生根培养基中，转入单株生长或单株丛生的无根小苗培养其生根。生根培养基采用1/2MS培养基，加入适量生长素。当小植株生出3～5条水平根，每根长2～3cm

时为最适宜的出瓶炼苗阶段。通常将其从根状茎基部切下转入壮苗培养基中培养，培养温度提升至28℃，当苗长至12cm高，具有3～4片真叶时就可以移栽。

（二）试管苗的驯化移植

试管苗驯化移植是组培快繁的重要环节。

移植前可将培养瓶在自然光下炼苗15～

20d，以使其感受温差现象，之后再开瓶移植。

移植时洗去根部的琼脂，置于阴凉处，待苗木阴干后，就可以移植到通气、透水，保湿基质中。移栽基质

对成活率的影响很大，采用蛭石、珍珠岩和木屑混合物加入少量腐殖质含量高的土壤作为基质栽培建兰试管苗，

成活率高可以达到

98%

以上植物生长茁壮。如果只用蛭石和珍珠岩作为兰花栽培基质，成活率虽高，但植物

生长一般。另外移栽后

2

周内要采取一定的保温措施。