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串联层析名词解释

发表时间：2024-07-30 06:17:17 来源：网友投稿

串联亲和纯化（TAP/MS）是免疫共沉淀（Co-IP/MS）的“近亲”，两者在寻找诱饵蛋白的互作蛋白以及纯化互作蛋白的原理方面非常相似。但是TAP/MS经过2步亲和纯化，而Co-IP/MS只有1步亲和纯化，故而TAP/MS可以有效减少非特异蛋白的结合。

基本流程：构建含有目的基因的载体，使目的基因与2个不同的表位标签融合表达，如Flag、HA、His、CBP、SBP等等。采用Flag-HA双标签载体；载体转染细胞并表达融合蛋白“Flag-HA-诱饵蛋白”；细胞裂解提取总蛋白，经anti-flag树脂和anti-HA树脂的两步纯化和洗脱，更大限度了去除了假阳性蛋白。洗脱液进入质谱仪，分析鉴定与诱饵蛋白具有相互作用的蛋白。

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