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分子生物学实验包括哪些实验

发表时间：2024-07-31 20:44:19 来源：网友投稿

离心技术：是分离纯化蛋白质、酶、核酸（DNA、RNA）、细胞的最常用方法之一。

电泳（electrophoresis）：带电粒子在电场中向着与其所带电荷相反方向电极移动的现象。可用于分离不同分子量的生物大分子。

1.蛋白质的电泳：用途：蛋白质的定量。

2.核酸的电泳：用途：用于核酸的分离、鉴定、纯化、回收。比如：我只需要长度300bp左右的分子。那么电泳后在切胶过程中，只切300bp处的分子即可。蛋白质研究相关的技术：

1. 含量测定：

2. 结构的测定：

（1）一级结构的测定：搞清楚蛋白质肽链的氨基酸排列顺序。方法：Edman降解法、质谱法（MS, 将蛋白水解，多肽链分成小段。检测肽段）（2）空间结构测定：蛋白空间结构分析比一级结构分析复杂得多。方法：X射线衍射晶体分析法、核磁共振法等。

3. 功能的测定：

（1）酵母双杂交（YTH）：假设：欲检测蛋白X与蛋白Y是否相互作用。检测方法：将蛋白X与报告基因转录因子的BD融合；将蛋白Y与AD融合；确认蛋白X与蛋白Y形成的复合体能否激活报告基因的表达。如果能激活报告基因的表达，说明：X与Y形成了复合体，则BD和AD靠近，激活了下游报告基因的表达；反之，报告基因不表达。原理：真核生物的转录因子（尤其是酵母转录因子GAL4），包括两个彼此分离、但功能必需的结构域：一个是与DNA结合的结构域-BD；一个是转录激活域-AD。BD识别转录因子效应基因的上游序列并与之结合；AD通过与转录复合体的其他成分作用，启动下游的基因转录。即使BD与AD分开，但如果在空间上较为接近时也能激活转录。——利用转录因子的BD、AD这一特性，通过检测转录因子是否启动了其效应基因的表达，可研究蛋白质X与Y是否相互作用。

（2）蛋白质芯片技术：一种高通量、微型化、自动化的蛋白质分析技术。一次试验中可同时检测几百甚至几千种目标蛋白或多肽。

（3）免疫印迹技术 Western blotting：利用抗原抗体特异反应的原理。用途：检测样品中特定蛋白质是否存在以及半定量分析、研究蛋白质间的相互作用。

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